【一】测定原理：
还原糖在碱性溶液中能将 Ag+, Hg+, Cu2+ ,Fe(CN)3-6一等金属离子还原 ,
而糖本身则氧化成各种类烃酸 , 利用这一特性可以对还原糖进行测定。斐林氏测定法 ,
就是采用斐林试剂作为氧化剂进行热滴定测定还原糖含量的方法。斐林试剂由甲乙两种溶液组成 :
甲液中含有硫酸铜、次甲 基蓝 ( 甲烯蓝 ) ; 乙液中含有氢氧化纳、酒石酸绑纳和亚铁氧化钾〈黄血盐 )
。当甲乙两液混合时 , 硫酸铜和氢氧化纳作用形成 氢氧化铜沉淀 , 由于溶液中存在酒石酸饵锅 , 它和氢氧化铜形
成了可溶性络合物。酒石酸络铜饵纳盐在与还原糖共热时 , 二 价铜离子即被还原成一价的氧化亚铜红色沉淀 ,
此氧化亚铜 与试剂中亚铁氧化钾反应 , 生成可溶性的亚铁氨酸络铜钾盐。
斐林试剂中二价铜的还原力比次甲基蓝强 , 因此 , 所滴入的标准葡萄糖液首先使二价铜还原 ,
只有当二价铜被还原完 毕后才能使次甲基蓝还原为无色 , 测定时 , 以此作为滴定终
点。根据消耗的标准葡萄糖滴定量 , 计算出测定样品中的还原 糖数量 , 最后算出灵芝的多糖含量。
使用仪器：5 毫升吸管 4 支 ,10 毫升吸管 2 支 ,100 毫 升容量瓶 3 只 ,150 毫升烧杯 l
只 ,100 毫升烧杯 1 只 ,250 毫 升三角烧瓶 6 只 ,25 毫升滴定管 1 支 ,300 瓦电炉
l 只 , 天平1 台。
试剂：
(1) 斐林氏甲液硫酸铜 15 克 , 次甲基蓝 0.05 克 ? 溶于1 升蒸馆水中。
(2) 斐林氏仁液酒石酸饵纳 50 克 , 氢氧化纳 54 克 , 亚铁氧化绑 4 克 , 溶于 1
升蒸馆水中。
(3) 0.1% 标准葡萄糖溶液准确称取干燥恒重的葡萄糖1 克 , 加入少量蒸馆水溶解后 , 再加 8
毫升浓盐酸 ( 防止微生 物生长 ) , 蒸馆水定容至 1 升。
(4) 其他 , 试剂 6 摩 / 升盐酸 ,6 摩 / 升氢氧化锅。
【二】测定步骤：
(1) 还原糖提取准确称取灵芝子实体粉
( 干燥 , 过 50 目筛 )2 克 , 用 95 ° C 热水抽提水溶性多糖 3 小时 , 重复 3
次。合并 抽提液 , 最后定容至 100 毫升 , 经过滤后取滤液进衍还原糠机定。如果样品是灵芝多糖胶囊
, 则从胶囊中取出灵芝多糖粉粒 , 准确称重 , 溶于蒸馆水中 , 定容至 100 毫升 , 过滤后进行还
原糖测定。
(2) 总糖水解与提取准确称取干燥灵芝子实体粉
1 克 ( 如果样品是灵芝多糖胶囊 , 则从胶囊中取出灵芝多糖粉粒 ,准确称重 ) , 放小烧杯中加 6 摩 /
升盐酸 10 毫升 , 蒸馆水 15 毫 升 , 在沸水浴上加热半小时 , 使总糖全部水解成还原糖 , 取出
后用 6 摩 / 升氢氧化锅中和至中性 , 然后定容至 100 毫升。经过滤后取滤液 10 毫升稀释至 100
毫升 , 即总糖为稀释 1000 倍的总糖稀释液。
(3) 糖的定量测定在三角瓶中 , 按表 5 一 3 加入各种试 剂。在加入斐林试剂的甲液和乙液后 ,
为了保证处于沸腾状态 下快速滴定〈整个滴定时间在 3 分钟内完成 ) , 在滴定前先从
滴定管中加入适量的葡萄糖液 , 然后在沸腾状态下以 4'"'"'5 秒 一滴的速度 ,
继续从滴定管中加入葡萄糖液 , 直滴至蓝色正好 消失为止 , 此为滴定终点。此时斐林试剂中的二价铜离子正好
全部被还原。因而使甲基蓝还原成无色。
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